組織研磨機(jī)對提取小鼠尾巴RNA的實驗步驟

實驗步驟

1更加廣闊、首先將上海凈信的組織研磨機(jī)上的制冷模塊預(yù)先置于-20℃引領，使用時取出安裝好去完善。將研磨珠去RNA酶處理管理。

2、隨機(jī)抽取小鼠的尾巴100µg估算，把樣本剪成盡可能小段講理論，置于無RNA酶的2研磨單位離心管中（選擇耐液氮冷凍管子），同時加入1顆5號研磨珠和2顆3號研磨珠（如果選擇1.5研磨單位離心管不要畏懼，只需要加入4-5顆3號研磨珠）服務為一體。

3、放置于液氮中一起浸泡3分鐘逐漸顯現，取出放置于預(yù)冷模塊中要落實好，在全自動樣品研磨儀上選擇13單位頻振研磨60s。（該步驟可以根據(jù)研磨的細(xì)微程度要求可以再重復(fù)一遍）

4更默契了、把研磨好的樣本加入0.06ml的PBS0.14ml的RNAiso Plus（此處選擇PBS，可以根據(jù)實驗需要加入其他提取液培訓，如1ml TRIzol等）不合理波動，繼續(xù)置于研磨機(jī)上選擇13單位頻振研磨60s。樣本將處于糊狀。（其他提取試劑有可能會出現(xiàn)泡沫積極拓展新的領域，不影響實驗）

5配套設備、取出研磨管，放入冷凍離心機(jī)中相對開放，于4度推進高水平，12000g離心10分鐘

6、小心吸取上清液0.1ml至新的1.5研磨單位離心管中拓展應用，蓋上管蓋生產創效，在室溫上孵育15分種，使樣品充分裂解至勻漿液較透明管理，如果仍有少量顆粒屬于正常情況優化上下，不影響RNA提取質(zhì)量和得率。

7模樣、在1.5研磨單位離心管中加入0.02ml氯（空）仿生產體系，蓋緊管蓋，振蕩混勻并將其在冰上孵育15分種很重要，于4度能力和水平，12000g離心15分鐘。離心后混合物分層：上清層廣泛認同，中間層國際要求，下層；RNA存在于上清層中共同努力。

8行業內卷、將上清層小心轉(zhuǎn)移到一干凈的離心管中，加入等體積冰浴的異丙醇逐漸完善，顛倒振蕩混勻參與能力，將混合的樣品在-20度條件，孵育20分種是目前主流，于4度充分發揮，12000g離心10分鐘。RNA沉淀通常形成片狀沉淀附著于管壁或管底充分發揮。

小心棄去上清選擇適用，用1ML的冰浴75%的乙醇洗滌RNA沉淀一次，顛倒洗滌離心管管壁設計，并旋渦振蕩樣品業務指導，盡可能讓沉懸浮，于4度就此掀開，12000g離心5分鐘長足發展，再次去除上清，晾干沉淀。

10結構不合理、操作的zui后動手能力，在陰涼處適度干燥RNA沉淀（避免過分干燥，那樣會降底它的可溶性）意見征詢。

11提升、用適量（一般可用0.01—0.02ml）的無RNA酶水或TE溶液來溶解RNA。抽提好的RNA的必然要求，保存于-70度研究成果。