組織研磨機(jī)對(duì)提取動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
       研磨破碎軟骨組織（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨）運行好，提取其總RNA必然趨勢。
 
實(shí)驗(yàn)原理
       充分磨碎軟骨樣品（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨）不容忽視，再用相關(guān)試劑提取其總RNA。
 
實(shí)驗(yàn)材料和器具
樣品：大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨
儀器：多樣品組織研磨儀（上海凈信實力增強，Tissuelyser-24）
耗材：研磨罐（上海凈信保障性，1研磨單位）重要的作用，研磨珠（上海凈信競爭力，8號(hào)研磨珠，1顆）
試劑：液氮若干
 
實(shí)驗(yàn)步驟
1.研磨軟骨組織
1.1 取適量大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織助力各行，剪切成約1立方厘米小塊前來體驗；
1.2 將小塊軟骨組織置于液氮中2分鐘或放入-80度冰箱冷凍30分鐘；
1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐中確定性，蓋好蓋子更加廣闊；
1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管，放入已經(jīng)在-20度冰箱預(yù)冷好的適配器中相貫通，加入變性液不斷發展，β-巰基乙醇積極影響；
1.5 將適配器放入凈信研磨儀中自動化方案，在14單位頻振條件下，研磨1min越來越重要，可得到勻漿狀的軟骨組織線上線下；
2.總RNA提取
2.1 冰水浴下，加酸性水飽和酚醒悟，搖勻數據顯示，加醋酸鈉，氯f(wàn)ang也逐步提升、異戊醇混合液記得牢，冰水浴上15min；
2.2 4℃下重要的作用，離心更多可能性，取上清液，加氯f(wàn)ang足夠的實力、異戊醇混合液緊迫性，離心取上清，加異丙醇，-20℃下沉淀高效，離心溝通協調，得到凝膠狀RNA和蛋白多糖混合沉淀，加無(wú)RNA酶水全方位，溶解得膠狀溶液高效節能；
2.3 取膠狀溶液用plant RNAout試劑盒的RNA提取步驟得到總RNA沉淀，取沉淀深刻認識，乙醇洗滌后用無(wú)RNA酶水溶解沉淀核心技術，即得關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA溶液。
 
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
       采用本實(shí)驗(yàn)方法提取的動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA的收率高主動性，并且純度高創造性、質(zhì)量、完整性好道路，可以滿足分子生物學(xué)研究應(yīng)用規模設備。

         總RNA甲醛變性膠電泳結(jié)果

        Ⅱ型膠原PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

參考文獻(xiàn)：

［1］劉玉剛等，一種富含多糖的關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA提取方法初探指導，第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)：2009年24期競爭力。