組織研磨機(jī)對提取動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
       研磨破碎軟骨組織（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨）穩定，提取其總RNA改造層面。
 
實(shí)驗(yàn)原理
       充分磨碎軟骨樣品（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨），再用相關(guān)試劑提取其總RNA優勢與挑戰。
 
實(shí)驗(yàn)材料和器具
樣品：大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨
儀器：多樣品組織研磨儀（上海凈信經驗分享，Tissuelyser-24）
耗材：研磨罐（上海凈信，1研磨單位）趨勢，研磨珠（上海凈信有力扭轉，8號研磨珠，1顆）
試劑：液氮若干
 
實(shí)驗(yàn)步驟
1.研磨軟骨組織
1.1 取適量大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織設備製造，剪切成約1立方厘米小塊發展需要；
1.2 將小塊軟骨組織置于液氮中2分鐘或放入-80度冰箱冷凍30分鐘攻堅克難；
1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐中，蓋好蓋子顯示；
1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管雙向互動，放入已經(jīng)在-20度冰箱預(yù)冷好的適配器中，加入變性液設計能力，β-巰基乙醇品牌；
1.5 將適配器放入凈信研磨儀中，在14單位頻振條件下更為一致，研磨1min等形式，可得到勻漿狀的軟骨組織；
2.總RNA提取
2.1 冰水浴下研究與應用，加酸性水飽和酚飛躍，搖勻，加醋酸鈉全面協議，氯fang重要部署、異戊醇混合液，冰水浴上15min工具；
2.2 4℃下智慧與合力，離心，取上清液重要的角色，加氯fang開放要求、異戊醇混合液，離心取上清平臺建設，加異丙醇服務機製，-20℃下沉淀，離心重要的作用，得到凝膠狀RNA和蛋白多糖混合沉淀蓬勃發展，加無RNA酶水，溶解得膠狀溶液積極回應；
2.3 取膠狀溶液用plant RNAout試劑盒的RNA提取步驟得到總RNA沉淀重要性，取沉淀，乙醇洗滌后用無RNA酶水溶解沉淀多種場景，即得關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA溶液多元化服務體系。
 
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
       采用本實(shí)驗(yàn)方法提取的動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA的收率高，并且純度高擴大公共數據、質(zhì)量深度、完整性好，可以滿足分子生物學(xué)研究應(yīng)用。

         總RNA甲醛變性膠電泳結(jié)果

        Ⅱ型膠原PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

參考文獻(xiàn)：

［1］劉玉剛等開拓創新，一種富含多糖的關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA提取方法初探持續發展，第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)：2009年24期。