WB高產,蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)又稱免疫印跡(immunoblotting)積極性,是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上高效利用,然后利用抗體進行檢測的方法。通過抗原抗體反應(yīng)對目標(biāo)蛋白的表達(dá)進行半定量檢測更默契了,還可用于蛋白-蛋白重要的作用、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后續(xù)分析提單產。WB作為一種方便可靠的研究工具促進善治,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達(dá)研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面趨勢,將與質(zhì)譜和蛋白質(zhì)芯片等技術(shù)一起在蛋白質(zhì)組時代發(fā)揮重要作用有力扭轉。
目前科研人的 WB 現(xiàn)狀就是干貨都懂,實驗狀況卻頻出一站式服務。辛辛苦苦花時間制備的細(xì)胞卻遇到提取液檢測不到目的蛋白廣度和深度、目的蛋白信號弱 、轉(zhuǎn)膜效率低 引領作用、顯色或曝光后無條帶 加強宣傳、Western blot背景高且不均勻、非特異性條帶用的舒心、條帶拖尾或變形等常見的問題在此基礎上。有效的樣品制備是影響 WB 實驗可重復(fù)性的重要因素。貴州醫(yī)科大學(xué)分子重點實驗室就使用上海凈信冷凍研磨儀制備了人體胃癌細(xì)胞樣品提取蛋白做WB實驗前來體驗。
實驗樣品:人體胃癌細(xì)胞自主研發;
實驗器材:冷凍研磨儀JXFSTPRP-CLN、研磨管更加廣闊、氧化鋯珠若干損耗;
實驗步驟:
1.細(xì)胞沉淀,加緩沖液不斷發展,提取液,離心重懸自動化方案;
2.加入氧化鋯珠緊密協作,與細(xì)胞沉淀物的比例1:1越來越重要;
3.設(shè)置研磨參數(shù),啟動發揮重要作用。
實驗效果圖:
研磨前(未加研磨珠-加研磨珠-研磨后)
附:實驗儀器圖片凈信冷凍研磨儀JXFSTPRP-CLN
上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀是一種快速醒悟、高效、制冷的研磨系
統(tǒng)高質量。它能在非常短的時間內(nèi)將土壤也逐步提升、植物和動物的組織/器官、細(xì)菌註入了新的力量、酵母重要的作用、真
菌、孢子去創新、古生物標(biāo)本等樣品完成研磨足夠的實力、粉碎、混合機細(xì)胞破壁結構。廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)更適合、醫(yī)藥、生化溝通協調、環(huán)境要素配置改革、地質(zhì)、農(nóng)業(yè)保障性、林業(yè)帶動產業發展、質(zhì)檢、材料等領(lǐng)域持續發展。