激光共聚焦顯微鏡可以觀察到細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)標(biāo)記好的蛋白質(zhì)和分子，為生物學(xué)研究提供了更直觀的觀測方法應用情況。如今，激光共聚焦成像已經(jīng)是一個非常常規(guī)的實(shí)驗(yàn)操作，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個研究領(lǐng)域中信息化。
在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中傳承，如果要進(jìn)行一次激光共聚焦成像發揮，除了要知道相關(guān)的顯微鏡參數(shù)設(shè)置和操作以外組織了，樣品的準(zhǔn)備也是非常重要的一個環(huán)節(jié)。
由于激光共聚焦實(shí)驗(yàn)對觀測耗材的底部有著比較高的要求說服力，普通的培養(yǎng)皿搶抓機遇，培養(yǎng)板或者培養(yǎng)瓶都不能直接用于激光共聚焦成像。
1.比較常用的是使用170μm左右厚度的蓋玻片作為激光共聚焦成像的細(xì)胞載體表示。但是使用蓋玻片全面闡釋，在實(shí)驗(yàn)操作上是非常麻煩的，如果買的是國產(chǎn)的蓋玻片競爭力所在，首先要做的一步是將蓋玻片清洗并且烘干滅菌引人註目，才能開始使用。
2.進(jìn)口的細(xì)胞爬片溝通機製，雖然不需要清洗好宣講，但是還是需要進(jìn)行包被才能讓細(xì)胞正常貼壁生長。通常是將處理好爬片直接放在多孔板中領先水平，然后鋪細(xì)胞，熒光染色后，再用鑷子將爬片拿出戰略布局，反過來放在滴有封片劑（甘油配置）的載玻片上事關全面，再進(jìn)行成像。如圖1所示：
圖1：使用蓋玻片和細(xì)胞爬片的做免疫熒光方法示意圖
操作流程：
1.蓋玻片需用濃硫酸浸泡過夜狀態，第二天用自來水沖洗20遍技術節能，置于無水乙醇中6小時，后用三蒸水沖洗3遍廣泛認同，再放在飯盒或玻璃培養(yǎng)皿中烘干國際要求，消毒，再烘干后放入超凈臺備用鍛造。
2.準(zhǔn)備好的蓋玻片或者專業(yè)的細(xì)胞爬片需要根據(jù)細(xì)胞的貼壁情況使用多聚賴氨酸等蛋白包被行業內卷。
3.培養(yǎng)板中放置爬片非常有技巧，要將爬片與培養(yǎng)板底部緊密貼合新的動力，這樣才能避免長成雙層細(xì)胞的過程中。
4.常規(guī)免疫熒光操作后發展契機，取出爬片。準(zhǔn)備載玻片一張促進進步，在中間滴加適量的封片劑（甘油配置）發力，將蓋玻片或爬片翻過來，蓋在封片劑上迎來新的篇章，再用指甲油封片進(jìn)行成像共創美好。
5.在激光共聚焦成像之前，盡量用熒光顯微鏡檢查一下細(xì)胞狀態(tài)和成像效果薄弱點，再去做激光共聚焦覆蓋範圍，畢竟做一次激光共聚焦的成像也不便宜的。
ibidi無需爬片的簡便方法
這里要介紹ibidi的簡便方法積極性，大大簡化了樣品準(zhǔn)備流程奮勇向前，需要用到專為共聚焦實(shí)驗(yàn)設(shè)計的共聚焦培養(yǎng)皿，這里以德國ibidi的共聚焦培養(yǎng)皿為例（ibidi 81156實施體系，ibiTreat底部處理）進(jìn)行說明組建。共聚焦培養(yǎng)皿的底部是polymer聚合物材質(zhì)，具有親水表面效果較好，讓大多數(shù)種類的細(xì)胞都可以直接貼壁重要的意義，無需另外進(jìn)行包被；同時等多個領域，它們的底部符合蓋玻片標(biāo)準(zhǔn)——厚度僅為180μm再獲，在折射率，阿貝系數(shù)上應用擴展，它們的性能和標(biāo)準(zhǔn)爬片一致激發創作，再加上極低的自發(fā)熒光和細(xì)胞可以直接貼壁的特性，使它們成為共聚焦成像的專用培養(yǎng)皿進一步意見。
所有的操作都在培養(yǎng)皿中進(jìn)行增幅最大，不再需要鑷子以及繁瑣的清洗，滅菌生產能力，包被程序（流程如圖2所示）
圖2：共聚焦專用培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備樣品流程標準，可以直接進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)－染色－成像操作（圖中使用的產(chǎn)品為ibidi 81156共聚焦培養(yǎng)皿）
操作流程：
1.在超凈臺中打開無菌包裝的共聚焦專用培養(yǎng)皿，取出培養(yǎng)皿堅持好，加入細(xì)胞懸液重要作用，蓋上皿蓋，放入培養(yǎng)箱中靜置習慣，等待細(xì)胞貼壁充足。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞長置合適密度再取出的積極性，進(jìn)行免疫熒光染色綠色化發展。
2.吸出培養(yǎng)基至關重要，以PBS清洗細(xì)胞，再用2%的多聚甲醛PBS溶液固定細(xì)胞用上了。
3.20分鐘后提升行動，吸出固定液，加入0.1%Triton X-100
4.10分鐘后關註，吸出Triton研究進展，清洗細(xì)胞后加入BSA封閉。
5.加入抗體熒光染色后連日來，吸出所有試劑快速融入，加入封片劑，可以開始共聚焦顯微成像系統。
使用共聚焦培養(yǎng)皿還有個好處：往往一個共聚焦掃描成像持續(xù)時間很長增強，培養(yǎng)皿中的液體非常容易揮發(fā)，共聚焦培養(yǎng)皿有皿蓋形式，可以減少揮發(fā)置之不顧；如上述提到的ibidi共聚焦培養(yǎng)皿不斷完善，有個巧妙的鎖扣設(shè)計數字化，可以扣緊培養(yǎng)皿，確保在共聚焦成像的過程中基礎上，皿中的液體不會揮發(fā)(如圖3）各領域。
圖3：ibidi共聚焦培養(yǎng)皿的鎖扣設(shè)計
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