腸道黏膜是身體重要的免疫屏障深入交流,由相關(guān)的淋巴組織和免疫細(xì)胞構(gòu)成。腸道黏膜異常被認(rèn)為與多種疾病密切相關(guān),如炎癥性腸病優化程度、IgA 腎病等競爭力。
科學(xué)家從未停止對腸道黏膜免疫屏障的探索取得了一定進展。腸道固有層分布著豐富的免疫細(xì)胞組織了,他們在維持腸道免疫穩(wěn)態(tài)方面十分重要建言直達,制備相應(yīng)的單細(xì)胞懸液技術節能,對腸道固有層細(xì)胞進(jìn)行研究指導,對探索腸道疾病的發(fā)病機制、疾病治療的作用靶點以及藥物起效的作用機制具有重要意義國際要求。
單細(xì)胞懸液制備步驟
1流動性、小腸樣品制備
采用頸椎脫位法處理小鼠后固定于手術(shù)臺,于腹部噴灑 75% 乙醇消毒競爭激烈,對皮膚和肌肉層進(jìn)行中線切口持續創新,暴露腸道,并從盲腸端開始截取 10 cm 小腸空白區, 隔醫(yī)用紗布放置于冰上協調機製,小心地用眼科手術(shù)剪和鑷子去除小腸腸系膜和脂肪組織信息化,并去除派氏結(jié)嵺`者?v向剖開小腸充分發揮,PBS 緩沖液沖洗腸道內(nèi)容物直至干凈。
2管理、試劑配置
根據(jù)后續(xù)實驗選擇配套的消化酶試劑盒設計,流式分析,原代培養(yǎng)等可選用溫和酶消化試劑盒改進措施。
3就此掀開、小腸固有層單細(xì)胞懸液制備
每個樣品準(zhǔn)備好對應(yīng)的消化酶和終止液,常溫解凍奮勇向前。在平皿中用 PBS 緩沖液清洗腸段并用眼科手術(shù)剪剪成小塊( 約5 mm長) 不斷豐富。將小腸小塊收集在含有消化酶的消化管中。
將消化管放入單細(xì)胞胞懸液制備儀上組建,選擇對應(yīng)的腸道程序各有優勢,程序結(jié)束后,儀器自動停止重要的意義,然后加入終止液持續,離心,棄掉上清再獲,用培養(yǎng)基重懸即可得到小腸固有層單細(xì)胞懸液產品和服務。(如下圖)
采用單細(xì)胞懸液制備儀進(jìn)行,可批量制備單細(xì)胞懸液體驗區,節(jié)約了實驗時間增多,儀器上有人體和小鼠各個組織、器官對應(yīng)的程序有望,提高了單細(xì)胞懸液制備的活率和得率進一步推進,使后續(xù)實驗進(jìn)行更加順利。