腸道黏膜是身體重要的免疫屏障,由相關的淋巴組織和免疫細胞構成高質量。腸道黏膜異常被認為與多種疾病密切相關充分發揮,如炎癥性腸病、IgA 腎病等管理。
科學家從未停止對腸道黏膜免疫屏障的探索設計。腸道固有層分布著豐富的免疫細胞,他們在維持腸道免疫穩(wěn)態(tài)方面十分重要改進措施,制備相應的單細胞懸液就此掀開,對腸道固有層細胞進行研究,對探索腸道疾病的發(fā)病機制今年、疾病治療的作用靶點以及藥物起效的作用機制具有重要意義穩步前行。
單細胞懸液制備步驟
1、小腸樣品制備
采用頸椎脫位法處理小鼠后固定于手術臺動手能力,于腹部噴灑 75% 乙醇消毒逐步改善,對皮膚和肌肉層進行中線切口,暴露腸道提升,并從盲腸端開始截取 10 cm 小腸大大提高, 隔醫(yī)用紗布放置于冰上,小心地用眼科手術剪和鑷子去除小腸腸系膜和脂肪組織應用前景,并去除派氏結有很大提升空間。縱向剖開小腸激發創作,PBS 緩沖液沖洗腸道內容物直至干凈建強保護。
2、試劑配置
根據(jù)后續(xù)實驗選擇配套的消化酶試劑盒非常重要,流式分析溝通機製,原代培養(yǎng)等可選用溫和酶消化試劑盒。
3標準、小腸固有層單細胞懸液制備
每個樣品準備好對應的消化酶和終止液示範推廣,常溫解凍堅持好。在平皿中用 PBS 緩沖液清洗腸段并用眼科手術剪剪成小塊( 約5 mm長) 。將小腸小塊收集在含有消化酶的消化管中大幅增加。
將消化管放入單細胞胞懸液制備儀上特性,選擇對應的腸道程序,程序結束后等特點,儀器自動停止建言直達,然后加入終止液,離心將進一步,棄掉上清充分發揮,用培養(yǎng)基重懸即可得到小腸固有層單細胞懸液。(如下圖)
采用單細胞懸液制備儀進行成就,可批量制備單細胞懸液重要方式,節(jié)約了實驗時間,儀器上有人體和小鼠各個組織系統、器官對應的程序非常重要,提高了單細胞懸液制備的活率和得率,使后續(xù)實驗進行更加順利提升。